| 發布日期： 2010-02-22 | 小 | 中 | 大 | 【關閉窗口】 |
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1.2.1 心康片對缺氧誘導血管內皮細胞損傷的保護作用研究 采用人臍靜脈內皮細胞株ECV－304（引自美國組織培養庫ATCC CRI-1998），在Marcy-Etoile 公司缺氧裝置系統中建立體外細胞缺氧模型，心康片設置三個濃度作用于ECV－304細胞，細胞在缺氧條件下培養48h。 結果表明：從形態學觀察、流式細胞儀檢測及DNA電泳三種方法，均可顯示該藥能夠明顯抑制缺血所致的血管內皮細胞凋亡；減少缺氧條件下MDA的生成和LDH的釋放并能提高SOD活力。以上研究結果表明心康片具有保護缺氧誘導的血管內皮細胞損傷的作用，其作用機制與抗凋亡、抗脂質過氧化及提高SOD活力有關。 1.2.2 心康片對缺氧誘導的大鼠心臟微血管內皮細胞表達粘附分子、細胞存活、凋亡通路變化的影響 ① 心康片對大鼠心臟微血管內皮細胞活性的影響 采用原代大鼠心臟微血管內皮細胞（CMVECs）培養模型，采用法國BioMerieux○Rsa公司缺氧裝置系統，心康片在三個濃度下，與CMVECs細胞共孵育，缺氧條件下培養24小時。實驗結果表明：心康片可顯著抑制缺氧所致的大鼠CMVECs減少；顯著抑制由缺氧所致的線粒體膜電位的下降，提示該藥對缺氧損傷的大鼠CMVECs的保護作用可能是通過改善線粒體功能來達到。 ② 心康片對缺氧誘導大鼠心臟微血管內皮細胞表達粘附分子信號通路變化的影響。 采用上述大鼠CMVECs缺氧模型，心康片在三個濃度下與細胞共孵育。 實驗結果：與正常對照組細胞相比，心康片中、高劑量組能顯著抑制缺氧誘導的大鼠CMVECs中p38MAPK及其下游蛋白HSP27的表達，繼而降低細胞間粘附分子VCAM-1及ICAM-1的表達；另外心康片各劑量組均能明顯減少CMVECs細胞核轉錄因子NFκB的表達，從而抑制缺血所致的細胞凋亡。提示該藥物可有效抑制缺血時內皮細胞介導的炎性反應過程，進而對心肌損傷起到保護作用。 ③ 心康片對缺氧引起的大鼠心臟微血管內皮細胞存活、凋亡通路的影響 采用上述大鼠CMVECs缺氧模型，心康片在三個濃度下與細胞共孵育。 實驗結果：實驗檢測了MAPK的其它兩個成員ERK1/2及JNK的表達。通常情況下，ERK1/2與細胞分裂增殖密切相關，而JNK誘導細胞凋亡。與正常對照組比較，心康片中、高劑量能顯著促進ERK1/2的表達，降低JNK的表達。各劑量對癌基因c-fos的表達無明顯影響，能顯著降低由于缺氧所致的癌基因c-jun表達升高。PI(3)K-Akt-eNOS通路與細胞存活密切相關。與正常對照組比較，缺氧模型組表達Akt及eNOS顯著下降。中、高劑量組均能顯著升高Akt、eNOS的表達；誘導型一氧化氮合酶（iNOS）與多種心臟疾患有關，與正常對照組比較，各劑量組均能降低缺氧誘導大鼠CMVECs表達iNOS。 以上試驗結果提示，心康片通過激活PI(3)K-Akt-eNOS細胞存活通路，抑制c-jun以及iNOS表達，從而促進細胞存活、抑制細胞凋亡，；另外可對抗心肌缺血時血管內皮細胞介導的炎性反應過程與細胞凋亡。 小結：心康片抗心肌缺血的作用機理為： （1）抑制缺氧誘導的血管內皮細胞凋亡，改善線粒體能量代謝； （2）抑制缺血時內皮細胞介導的炎性反應過程，從而減輕心臟微血管內皮細胞的炎性損傷。 2. 一般藥理研究 2.1 心康片對正常小鼠中樞神經系統的影響 設置三個劑量組，考察心康片對小鼠自主活動、協調運動、戊巴比妥鈉閾下劑量協同催眠時間等的影響，研究藥物對小鼠中樞神經系統的影響； 試驗結果：心康片三個劑量對小鼠中樞神經系統均未見影響 2.2 心康片對麻醉犬呼吸系統和心血管系統的影響 設置三個劑量組，檢測心康片對Beagle犬呼吸頻率、呼吸深度、收縮壓、舒張壓、平均動脈壓及心電圖各項指標的影響，來反映藥物對呼吸系統和心血管系統的安全性。 試驗結果：心康片三個劑量對麻醉犬呼吸系統和心血管系統均未見影響。 3. 普通毒理學研究 3.1急性毒性試驗 ① 心康片灌胃給藥對小鼠的最大給藥量為6g/kg/天，藥后連續觀察14天，小鼠各系統均未出現異常表現，臟器取材肉眼未見明顯異常。 ② 心康片灌胃給予大鼠4g/kg/天，藥后連續觀察14天，大鼠各系統均未出現異常表現，臟器取材肉眼未見明顯異常。 ③ 心康片灌胃給予犬2g/kg/天，藥后連續觀察14天。犬各系統均未出現異常表現，臟器取材肉眼未見明顯異常。 小結：根據以上急性毒性試驗的研究結果，初步認為心康片安全性較好。 4. 特殊毒理研究 4.1 心康片致突變作用研究 ① 心康片致鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗 采用5個組氨酸營養缺陷型鼠傷寒沙門氏菌株TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535，設置空白對照組、溶劑對照組（DMSO 20μl/皿）、陽性對照組、心康片5個濃度組，分別在±S9mix條件下進行實驗。 結果：心康片各劑量組均沒有誘發上述五個菌株回變菌落數超過對照值2倍的情況，為陰性結果。 ② 心康片致中國倉鼠肺纖維細胞（CHL）染色體畸變試驗 實驗設置細胞對照組、溶劑對照組（2% DMSO）、陽性藥對照組，供試品共設三個濃度，檢測藥物在單獨作用于CHL細胞和與S9 共同作用于CHL細胞24h后細胞染色體的畸變率。 結果: 根據結果判定標準：直接陽性藥、間接陽性藥具有統計學意義，并有可重復性的陽性反應，因此，可判定直接陽性、間接陽性藥在本試驗系統中具有致突變性，供試品心康片各劑量組在±S9mix條件均未有統計學意義，并沒有劑量關系，為陰性結果。 結論：在本試驗條件下，心康片不引起培養的哺乳動物體細胞染色體結構畸變。 ③ 心康片致小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核形成試驗 以昆明種雄性成熟小鼠為實驗對象，設置空白對照組、溶劑對照組、陽性對照組和心康片低、中、高三個劑量組進行實驗，陽性對照組單次經腹腔注射給藥，除高劑量組外其余各組單次灌胃給藥，高劑量組兩次給藥，給藥后24h、48h采樣檢查小鼠股骨骨髓微核。 結果：溶劑對照組股骨骨髓的微核檢查結果與正常組比較無明顯差異,陽性組股骨骨髓的微核檢查結果與溶劑對照組明顯增加（P＜0.001），說明陽性組腹腔給藥誘發雄性昆明種小鼠骨髓微核的作用，實驗方法成功。心康片各劑量組股骨骨髓的微核檢查結果與溶劑對照組無明顯差異。 結論：心康片對昆明種雄性小鼠沒有誘發骨髓微核的效應。 小結：通過以上特殊毒理學試驗研究，進一步表明心康片安全性較好。 | ||
